[转帖]蛋白质体外磷酸化的操作步骤及一点点体会
摘要:在细胞的发展过程及其各种重要功能中,可逆的蛋白质磷酸化扮演了重要的角色。我们在做实验的过程中证明蛋白质体外磷酸化的实验经常碰到。在此,我以一种蛋白质激酶为例介绍蛋白质体外磷酸化的方法;同时,谈谈我做这个实验的一点点心得。希望对大家有点帮助。主要试剂:10x磷酸化buffer(200mM tris-HCl PH7.5 ,500mMKCl,100mM MgCl )PBS, 1xSDS电泳缓冲液 6xSDS加样缓冲液(参考精编分子实验指南第 ...
来源:丁香园论坛 32373 阅读
【资源】SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸的作用)
做了这么多的电泳一直都是闷着头做,今天突然意识到堆积胶和分离胶pH不同,不知为何。以下内容为转载。SDS-PAGE电泳的原理及浓缩胶浓缩样品的原理(甘氨酸的作用)SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是目前最常用的分离蛋白质的电泳技术。下面就SDS-PAGE的基本原理做简单介绍。SDS-PAGE电泳的基本原理?SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS, SDS能断裂分子内和分子间氢键 . ...
来源:丁香园论坛 31701 阅读
蛋白质凝胶电泳的操作方法
蛋白质凝胶电泳的操作方法【材料与试剂】(1)2×SDS凝胶加样缓冲液(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪(3)加样器和吸头等(4)水浴锅【操作方法】(1) 把上述处理的样品按1:1(V/V)与2×SDS凝胶加样缓冲液混合,100℃加热3分钟,使蛋白质变性;(2) 取出变性蛋白质,立即放于冰上。样品如粘稠可进行超声对DNA进行剪切,以最大功率处理0.5~2分钟应能有效地将裂解液粘稠 ...
来源:互联网 30208 阅读
SDS-PAGE原理
SDS电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,1969年由Weber和Osborn进一步完善。当在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDS后,则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小,其它因素可以忽略不计。SDS是一种阴离子去污剂,它能破坏蛋白质分子之间以及其它物质分子之间的非共价键。在强还原剂如巯基乙醇或二硫苏糖醇的存在下,蛋白质分子内的二硫键被打开并解聚成多肽链。解聚后的蛋白质 ...
来源:互联网 26105 阅读