聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验试剂:试剂贮备液:1、 1mol/L HCl48ml,Tris36.6g,TEMED0.23ml,加蒸馏水配成100ml,pH8.9。2、 1mol/L HCl48ml,Tris5.98g,TEMED0.46ml,加蒸馏水配成100ml,pH6.7。3、 Acr28g,Bis0.735g,加蒸馏水配成100ml。4、 Acr10g,Bis2.5g,加蒸馏水配成100ml。5、 核黄 ...
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SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法
几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集,最常用的就是SDS-PAGE电泳技术,关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论:Q:SDS-PAGE电泳的基本原理?A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠), SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多 ...
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SDS-PAGE失败实例及分析第二期 条带过浅
接上一期:一、症状——条纹拖尾条纹拖尾——例1这块胶就非常难看了。原因在于分离胶倒完之后没有用水或者异丙醇压胶,导致分离叫上缘非常粗燥,就像你看到的一样。当样品堆积在凹凸不平的分界线时,位于凹陷部位的蛋白由于不能适当的浓缩就析出来了。然后再跑胶过程中逐渐溶解造成了条纹拖尾症状。二、症状——条带过浅条带过浅——例1这个问题可能是由于加样孔成形不佳和/或凝胶加样不认真所致。背景较深而且不均一说明蛋白可能存在于电泳缓冲液中 ...
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等电聚焦电泳介绍
主要仪器试剂仪器:微型电泳系统、电源、注射器、固定和染色用容器试剂:丙稀酰胺、双-丙稀酰胺、载体两性电解质、尿素、过硫酸胺、TEMED、TritonX-100、2-巯基乙醇、溴酚蓝、磷酸、氢氧化钠、氯化钾、三氯乙酸、考马斯亮蓝、甲醇、乙酸。 储存液:1)30%(w/v)丙稀酰胺,1%(w/v)双-丙稀酰胺;2)20%Triton X100;3)10%三氯乙酸;4)1%三氯乙酸;5)1%溴酚蓝;6 ...
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