关键词: 蛋白染色 灵敏度 考马斯亮蓝
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一、各种蛋白染色方法的灵敏度比较
二、考马斯亮蓝染色
CBB 染色液:0.5%考马斯亮蓝 G250 或 R250;40%甲醇;10%乙酸;将 CBB 溶于甲醇中并不停的搅拌 15min。
加入乙酸与 ddH2O 脱色液:30%甲醇;10%乙酸
染色方法:1. 在摇床上染色 30min;2. 脱色至蛋白点或条带清晰可见;3. ddH2O 洗 3-5 次。
三、胶体考马氏亮蓝染色 ColloidalCoomassie Staining(Cambridgecentrefor porteomics)
sensitivity = ~100ng
1. 固定:甲醇/ 醋酸/H2O(45:1:54)至少 20min.
2. 染色 12-18hr。
染色液: 17% (w/v) 硫酸铵;34%甲醇;0.5%醋酸;0.1% (w/v) CoomassieG250。
3. 脱色:用 H2O 脱色至蛋白点和背景清晰.
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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
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WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
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WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
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