关键词: 蛋白质 凝胶电泳
来源: 互联网
30180 阅读
【材料与试剂】
(1)2×SDS凝胶加样缓冲液
(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳槽和电泳仪
(3)加样器和吸头等
(4)水浴锅
【操作方法】
(1) 把上述处理的样品按1:1(V/V)与2×SDS凝胶加样缓冲液混合,100℃加热3分钟,使蛋白质变性;
(2) 取出变性蛋白质,立即放于冰上。样品如粘稠可进行超声对DNA进行剪切,以最大功率处理0.5~2分钟应能有效地将裂解液粘稠度降至可控水平(注意:此步骤一定要在冰上进行);
(3) 如有沉淀以10 000g将样本4℃离心10分钟,将上清液移至另一管中,弃去沉淀物;
(4) 计算使用Western印迹法检测靶蛋白所需要的样本量,一般Western印迹法技术检测中等大小蛋白的检出下限约为1~5ng。在厚0.75mm的SDS聚丙烯酰胺凝胶上,每个泳道可加样100μg而不致过多;
(5) 用玻璃微量进样器按顺序加样,注意沿加样孔底上样,否则样品容易漂走。加样量不宜过多或过少,一般15~20ul为宜。没上样的加样孔中加1?SDS凝胶加样缓冲液;
(6) 用注射器排除两玻璃板底部的气泡,将电泳装置接通电源(正极接下槽,负极接上槽),凝胶上所加电压为8v/cm,当溴酚蓝前沿进入分离胶后,电压可提高到15V/cm,继续电泳直至溴酚蓝到达分离胶底部(约4小时),关闭电源;
(7) 从电泳装置上卸下玻璃板,放入一瓷盘中,用一注射器吸取若干毫升电泳缓冲液,将针头插入一玻璃板与凝胶之间,小心不要将凝胶刺破,沿玻璃板从左至右注入电泳缓冲液,将玻璃板与凝胶分开。靠近左边切去一角以标明凝胶的位置;
(8) 如不需做免疫检测可直接用考马斯亮蓝染色。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致
做这个实验的时,我同一批次提取的蛋白,胶跑出的条带都不一致,这是什么原因呢?
43 评论
WB 敷牛奶需要的时间
Western Blot 实验时敷牛奶大概多久?一定要过夜吗
42 评论
WB发光结果异常
我做WB也不算是新手,自己觉得整个过程也没有什么明显的问题,可是最后发光的时候内参整个是晕开的,分子还连成了一条线,之前没出现过这种情况,所以想请大家帮忙分析下,是胶的问题,蛋白的问题,还是什么别的,谢啦!
28 评论
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
蛋白质分离纯化方法(威斯腾生物-中关村生物医学研发检测共享平台!)
威斯腾生物
金牌会员 入驻 14 年
蛋白质双向凝胶电泳
北京百泰派克生物科技有限公司
钻石会员 入驻 8 年
DGGE(变性剂浓度等级凝胶电泳)用DNA Marker 以及蛋白质结晶KIT
上海甄准生物科技有限公司
金牌会员 入驻 12 年
蛋白质分析方法
上海鹿明生物科技有限公司
金牌会员 入驻 16 年
蛋白提取及SDS PAGE凝胶电泳试剂盒 蛋白质研究
北京百奥莱博科技有限公司
钻石会员 入驻 12 年
蛋白质含量的测定方法2.2:溶液A
深圳海思安生物技术有限公司
钻石会员 入驻 5 年
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号