蛋白质纯化亲和层析法
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段,而亲和吸附胶上接有镍离子,此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体;洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。
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蛋白浓缩方法详解
1,透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。主要用于更换蛋白质的缓冲液,有透析袋即可,不需要特 ...
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亲和层析的应用
亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。1.抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原经动物免疫 ...
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GST-融合蛋白的表达与纯化
原理GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。u Lysis bu ...
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