蛋白样品制备中各类杂质和杂蛋白的去除
蛋白样品制备中,在细胞破碎之后,既可以利用特定蛋白质的特性来分离某一类蛋白质,比如亲和纯化,比如前面介绍的磷酸化蛋白富集,或者膜蛋白富集;另外一个考虑方向是去除杂质----去掉样品中某些非目标高丰度蛋白或者杂质的干扰,同样可以达到简化样本的目的。当然要小心「倒洗脚水的时候别把婴儿也倒掉了」,一定要选择可靠的产品。比如,潜在疾病标志物的最好样本来源就是血清或其他体液,此类样本可以提供人蛋白质组中绝大部分组份。然而用蛋 ...
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酪蛋白的提取
一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。二、 实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质,约占乳蛋白的80~82%,酪蛋白不是单一的蛋白质,是一类含磷的复合蛋白质混合物,以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸,但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L,比较稳定,利用这一性质 ...
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亲和层析原理
生物分子间存在很多特异性的相互作用,它们之间都能够专一而可逆的结合,这种结合力就称为亲和力。亲和层析就是通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。被固定在基质上的分子称为配体,配体和基质是共价结合的,构成亲和层析的固定相,称为亲和吸附剂。亲和层析时首先选择与待分离的生物大分子有亲和力物质作为配体,并将配体共价结合在适当的不溶 ...
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亲和层析过程中的注意事项
1.上样亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短,通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件,包括上样流速、缓冲液种类、pH、离子强度、温度等,以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢,所以样品液的浓度不易过高,上样时流速应比较慢,以保证样品和亲和吸附剂有充分的接触时间进行吸附。特别是当配体和待分离的生物大分子的亲和力比较小 ...
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