重组胰蛋白酶最适温度和温度稳定性
样品:重组胰蛋白酶,比活 4000USP u/mg pro.,上海雅心生物技术有限公司,纯度如图 1 所示。BAEE,Sigma.图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定1. 最适温度的研究将底物 BAEE(0.25 mM)分别置于 4℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃ 和 70℃ 水浴中温浴 20 min,加入相同体积的 RPT 酶液测定 rPT 的活力,结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。2. 温度稳定性的研究 取 10 mg/ml RPT 纯酶液稀释 10 倍后,分别置于 4℃、15℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60 . ...
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【求助】如何判断一个蛋白是在转录水平起作用还是在翻译水平起作用?
yulanxin 最近在做荧光素酶双报告系统的实验,结果发现,用pcDNA3.1 overexpression我的目的蛋白后,随着目的蛋白剂量的增加,luciferase和Rellina的荧光值都有提高。由于该目的蛋白和许多mRNA的相关蛋白均有关系,因此我们推测该蛋白可能稳定了报告基因mRNA的寿命,导致其翻译水平的增加。但是,也有可能它是在转录水平促进了启动子的非特异性转录导致报告基因的mRNA水平增加,因此,想 ...
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His-Tag原核表达――Qiagen
近年来Qiagen公司无论在分子诊断方面,还是核酸、蛋白纯化方面都有出色的表现。在分子诊断这一块,根据Kalorama Information网站自2003年的统计,它作为分子诊断公司世界排名第九。在今年5月31号,它收购了artus公司,这是一家针对病原体、基因型和药物基因组学测试提供基于聚合酶连锁反应 (PCR)分子诊断公认的领导厂商,估计它作为分子诊断学公司的排名还将继续攀升。在核酸、蛋白纯 ...
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重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性
样品:重组胰蛋白酶,比活 4500USP u/mg pro.,上海雅心生物技术有限公司,纯度如图 1 所示。BAEE,Sigma.图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定1. 最适 pH 的研究准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE(0.25 mM),分别测定 rPT 纯酶液的活性,最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6),25 mM Tris-HCl (pH 7~8),25 mM Gly-NaOH(pH 9~12),所有缓冲液均为 25℃ 下配制。底物在 25℃ 温浴 10 分钟后,开始测活。2. pH 稳 ...
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