用于蛋白质表达和纯化的pET-32α(+)载体的构建
表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具,本文总结了pET-32α(+)载体技术的构建,该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段,将DNA片段亚克隆到pET-32α(+)表达载体中,在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践,重组DNA技术(或基因克隆)是指将DNA片段从一种生物体转移到自 ...
来源:丁香通 14546 阅读
浅谈流式核内蛋白染色步骤
【嘉美生物】北京嘉美生物就eBioscience公司的产品 (#00-5523 Foxp3 staining buffer set使用方法,也适用于胞浆和核内抗原的同时检测)浅谈流式核内蛋白染色步骤:1、染表面抗体按说明书条件孵育全血样品孵育抗体后加入不含固定剂的溶血素(按厂家说明操作)溶血完毕。2、用2ml预冷流式染色缓冲液(Flow Cytometry Staining Buffer)洗涤细胞300-400g离心5分钟,去上清。3、用3倍体 ...
来源:嘉美纽诺 14499 阅读
原核表达实验方法
一、原理1、E .coli 表达系统E .coli 是重要的原核表达体系。在重组基因转化入E .coli 菌株以后,通过温度的控制,诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质,将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。2、外源基因的诱导表达提高外源基因表达水平的基本手段之一,就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段,以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度诱导和药物诱导。本实验采用异丙基硫代-& ...
来源:互联网 13601 阅读
原核表达--宿主菌株选择指南
在原核蛋白表达过程中,选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素:表达载体、宿主菌株、表达诱导条件以获得最满意的表达效果。事实上,在平时的实验中,最容易被忽视的就是宿主菌的选择――多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株,或者是载体配套的菌株,而不去追究原因――即使表达结果不佳,大多在表达条件和载体上找原因,也不会考究菌株的选择是否适合。作为原核表达的宿主,对外源基因的表达会产生一定的 ...
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