6. 孵育后立刻在 2000rpm,开盖离心 1-2 分钟。弃去离心管柱,所得为脂肪组织中的总蛋白。提取出的蛋白中含有少量不溶物为非水溶性细胞组分。可以将其稀释后直接用于 ELISA 检测水溶性蛋白。也可以用缓冲液 B 或 C 重悬溶解非水溶性蛋白用于下游应用:
A. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 B 成为变性蛋白溶液(用于 SDS-PAGE,Western 和其他应用)或者 B. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 C 成为非变性蛋白溶液(用于 IP,ELISA 和其他应用)或者 C. 用 2X 的 2D 胶样品缓冲液溶解用于 2D 分析。
注意:缓冲液 A 中含有可能会感染质谱分析的组分。如果提取的蛋白用于质谱分析,在提取前需透析缓冲液,或者用 TCA 法沉淀蛋白。
从脂肪细胞中提取蛋白
1. 低速离心收集 50-100million 脂肪细胞。在 1.5 ml 离心管中加入 1 ml 预冷的 PBS(可根据上述建议加入磷酸酶抑制剂或者蛋白酶抑制剂)重悬细胞。加入 100 mg 蛋白提取粉