蛋白质的疏水层析纯化步骤---写给新手,请指正!
疏 水 层 析1、疏水层析是根据不同蛋白质的疏水力强弱不同来分离的。在高盐离子强度的情况下,蛋白质的疏水基团充分暴露与填料的疏水介质相互作用,从而结合在柱子上。不同蛋白质的疏水性强弱不同从而导致其与柱子填料的结合力也不同。随后,逐渐降低洗脱缓冲液的盐离子强度就可以将不同的蛋白分布洗脱下来,形成一个个的蛋白质洗脱峰。2、柱子的装填:如果是预装柱,就不存在装柱的问题了。不是,则从头开始:首先,把柱子洗干净,一定要洗干净,不然会出现 ...
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【求助】核蛋白提取
dldenglin 求细胞核蛋白提取的试剂配方,及步骤,最好是亲自做过的方法,万分感谢dldenglin 咋没有人理我呢johndxy117 来源不明,貌似是某文献作者传授给师兄的,自己试过几次,纯度很高,在此表示感谢~密度梯度离心法提核蛋白试剂Buffer A: 1.0mM MgCl225mM KCl10mM HEPES(pH 7.5)protease inhibitors 1:200Buffer B: 0.25mM sucrose in Buffer ABuffer N: 1.1mM su ...
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稳定蛋白质三维结构的作用力
稳定蛋白质三维结构的作用力主要是一些所谓弱的相互作用或称非共价键或次级键,包括氢键,范德华力,疏水作用和盐键(离子键)。此外共价二硫键在稳定某些蛋白质的构象方面也起着重要作用。氢键(hydrogen bond)在稳定蛋白质的结构中起着极其重要的作用。多肽主链上的羰基氧和酰胺氢之间形成的氢键是稳定蛋白质二 级结构的主要作用力。此外,还可在侧链与侧链,侧链与介质水,主链肽基与侧链或主链肽基与水之间形 ...
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蛋白质结构的测定
蛋白质结构的测定(一)蛋白质一级结构的测定 蛋白质一级结构的测定又称蛋白质序列分析。其基本方法是:①应用化学裂解法和蛋白酶水解法将多肽链专一性裂解;②逐一测定每个纯化小肽段序列;③根据肽段氨基酸序列中的重叠区确定小肽段的排列次序;④完成整条多肽链的序列分析。 尽管蛋白质序列分析已经自动化,但仍然耗时、复杂并且昂贵。重组DNA技术出现后,人们可以从cDNA或基因序列直接推导出蛋白质的氨基 ...
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