【原创】taq酶表达的一些个人经验
最近做了taq酶的表达和纯化,将优化的实验流程和一点心得贴上来,希望对大家有帮助,更希望得到批评和指正TaqDNA聚合酶表达载体的构建与提取纯化1 .背景重组TaqDNA聚合酶基因及表达载体插入重组Taq DNA聚合酶基因的pET-28a表达质粒,该质粒是由美国Novagen公司推出的能在大肠杆菌中高效表达的一种质粒载体。该质粒在克隆位点前有1个T7启动子,在T7启动子前有1个6×His-Tag coding序列,是T ...
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Science:G蛋白偶联受体信号转导机制
近日美国北卡罗来纳州大学布尔希尔医学院的科学家们称他们发现了G蛋白-PLC复合物的精密分子结构,并揭示了这条信号途径的机制。研究论文发表在世界知名的《科学》(Science)杂志上。
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【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤!!!(从验证到阳性克隆的筛选)
小弟把最近一个多月来所做的工作,做了个总结,供大家一起分享,希望版主能加分,现在我还是0分,很多帖子不能阅览,希望版主加分,今后我实验有了新的进展,我会把总结发上来,和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF,目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结,再与大家分享。希望大家支持,绝对原创!!!一.实验材料1.菌珠E.coli DH5αGS115酵母菌2.质粒PIC9K/VEGF165重组质粒3.试剂NB酵母氮 ...
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测定蛋白浓度三种常见方法
酪安酸差色光谱法1.打开分光光度剂,预热30分钟,是紫外灯处于稳定发光状态2.在2容积为1mlde 微量石英比色杯中分别加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸缓冲液,把盛有PH12.0缓冲液的比色杯放入样品杯中放入支架上,把盛有PH7.4缓冲液的比色杯放入到参比杯的支架上,然后准确的测出295nm波长下的光吸收值,或用250-350nm扫描3.在上述的2个比色杯中分别加入100UL的待测样品液,小 ...
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