PCR 扩增
基本概念聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction) (又称:多聚酶链式反应),聚合酶链式反应,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期循环进行使目的DNA得以迅速扩增具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。它不仅可用于基 ...
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PCR操作时应注意的事项
PCR检测微量感染因子时,容易因为污染的而导致各种问题,因此,进行PCR操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。(1)划分操作区:目前,普通PCR尚不能做到单人单管,实现完全闭管操作,但无论是否能够达到单人单管,均要求实验操作在三个不同的区域内进行,PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行:① 标本处理区,包括扩增摸板的制备;②PCR扩增区,包括反应液的配制和PC ...
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酶切位点的设计
把设计引物如何设计酶切位点这方面的帖子整理一下,因为昨天一下子看到三个相似问题。原帖如下:我想向你求教一个问题假如说我想把胰岛素基因和腺病毒载体连接起来如何确定设计目的基因PCR时的引物呢?和相应的限制性核酸内切酶呢?谢谢老师能给予讲解谢谢 :最初的时候,由于害怕设计酶切位点最后且不开,所以经常采用最通用的方法,用T载体克隆解决问题,但后来发现她也有问题,就是浓度提不上去,你需要体大量的载体来酶切 ...
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30多种PCR技术
1、Allele-specific PCR:等位基因特异性PCR,设计引物时选择在基因组的多态性区域,使等位基因的突变定位在(或接近)引物的3'端,在严谨的反应条件下,存在错配碱基的引物不能起始复制,而只有完全匹配的引物才能起始复制,产生的产物因此显示不同的基因型。2、Assembly PCR(也称作Polymerase Cycling Assembly或PCA):组装PCR通过使用多个具有短重叠区的长的寡核苷酸来合成长的DNA ...
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