影响PCR 结果的因素
1. 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。设计引物应遵循以下原则:(1)引物长度: 15-30 bp,常用为20 bp 左右。(2)引物扩增跨度: 以200-500 bp 为宜,特定条件下可扩增长至10 kb 的片段。(3)引物碱基:G+C 含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C 过多易出现非特异条带。A ...
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PCR产物双酶切及与载体的连接
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实时荧光定量PCR原理和实验
无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断,还是研究药物对基因表达水平的影响,或者监控药物和疗法的治疗效果,定量PCR技术都可以发挥很大作用。定量PCR技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA拷 ...
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怎样在线做PCR引物设计
怎样在线做PCR引物设计 来源:易生物实验 浏览次数:0 网友评论 0 条要先对PCR目的序列的长度有个大致估计:关键词:PCR引物设计要先对PCR目的序列的长度有个大致估计:第一步:找到Primer3的站点。你不用记住这个站点,但是要记住“Primer3”这个词,然后打开GOOGLE首页,输入Primer3,跳出来的第一个项目就是了“Primer3 Input 0.4.0 (primer3-w ...
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