11条PCR引物设计原则
1、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15-30碱基之间。 引物长度(primer length)常用的是18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于 ...
来源:互联网 87673 阅读
巢式PCR(Nested PCR)定义、原理和步骤
巢式PCR的定义巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通 PCR相似。第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。巢 式PCR的好处在于,如果第一次扩增产生了错误片断,则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此,巢 ...
来源:互联网 69923 阅读
Real-time qPCR手册---手把手教你从菜鸟到高手
由于Real-time qPCR的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项常规技术。越来越多的研究文章中涉及RT-PCR的实验,也基本上被real-time qPCR所代替。由于real-time aPCR 输出的数据不同于常规的PCR 电泳检测,很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测,不知从何入手;甚至一些做过次实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑,不知所措。 本文就从 ...
来源:互联网 68397 阅读
HindIII和Bamh1酶切位点保护碱基的详解
用于基因工程的工具酶 一限制性内切酶(Endonucleosase) (一)限制性内切酶(Endonucleosase)的发现与分类 1) 50年代初发现细菌能将外来DNA片段在某些专一位点上切断从而保证其不为外来噬菌体所感染而其自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护这种现象叫做限制-修饰它们由三个基因位点所控制:hsd R hsd M hsd S 十年后人们搞清了细菌的限制与修饰分 ...
来源:互联网 60774 阅读