[交流]PCR中出现非特异扩增
经常看到许多战友因为PCR的非特异扩增而烦恼,不如我们把我们曾经也遇到过这样问题,经过努力后得到了目的条带的成功经验一起分享。首先我先把我的消除非特异扩增的方法先贡献出来,请大家多多批评指正。PCR类型:Long PCR一、PCR体系1、酶:Pyrobest DNA Polymerase2、模板:人类基因组DNA3、引物:根据已知的DNA序列设计的引物。4、目的片段长度:约3.5K(上述四项,我个人认为应当注明,因为许多PCR可 ...
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PCR污染原因及对策
一、污染原因1. 标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于 密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。2. PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水 及其它溶 ...
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MicroRNA(miRNA)荧光定量PCR技术
什么是miRNAMicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA,是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成,不同于siRNA(双链)但是和siRNA密切相关。据推测,这些非编码小分子RNA(miRNAs)参与调控基因表达,但其机制区别于siRNA介导的mRNA降解。第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin-4 和 ...
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PCR基因扩增及扩增产物的回收
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