关键词: PCR
来源: 丁香园论坛
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2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行,这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念,将展示具有世界一流水平,符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案,本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度,但易污染一直是困扰各实验室的大问题,极微量的污染就可能造成假阳性反应,破坏试验结果。如何监测与防止PCR污染,是现在各实验室的重要课题。一、污染监测一个好的PCR实验室,必须要时刻注意污染的监测,考虑是否受到污染,如有污染,是何原因造成的。通过有效地监测,采取正确的相应措施,防止或消除污染。对照试验是监测PCR污染的重要手段。1、阴性对照:阴性对照是每次PCR实验都必须做的。它包括了标本对照与试剂对照,通过对照确认样本和试剂是否受到感染。2、阳性对照:它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好、经鉴定是该产物的标本。但阳性对照其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一PCR试剂已经使用稳定,检验人员完全掌握时,在之后的实验中应尽可能免设阳性对照。来减小污染概率。3、选择不同区域的引物进行PCR扩增。4、重复性试验。二、防止污染的方法1、合理分隔实验室:将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增以及PCR产物的鉴定等步骤进行分区或者分室,尤其要将样本处理和PCR产物的鉴定与其它步骤严格分开。理想的分区为,标本处理区、PCR反应液制备区、PCR循环扩增区、PCR产物鉴定区。2、PCR试剂要做好预混和分装:所有的PCR试剂都应进行小量分装,PCR反应液应尽可能预先配制好,然后再小量分装,在-20℃下保存,以减少重复加样次数,从而避免污染机会。另外,PCR试剂、PCR反应液应当与样品及PCR产物分开保存,不可放于同一冰盒或冰箱。3、吸样枪污染防护:吸样枪是一个非常容易发生污染的设备。如操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘在枪头上,将会成为一个严重的污染源,因而使用吸样枪时要格外小心,吸样要慢,并尽量一次性完成,忌多次抽吸,避免发生交叉污染或气溶胶污染。4、减少PCR循环次数:以PCR产物达到检测水平为宜。5、防止操作人员污染:使用一次性手套、吸头、小离心管。
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电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?
电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?不会没成功吧?
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双非博士真就如大家所说没有出路?
双非博士一枚,在老师的指导下,自己也算勤奋,发了三四篇SCI,其中有一篇顶刊,手头上还有一些工作没有处理完,本来心里有些自卑,面对现在外界所说双非博士的各种言论,导致自己有些不知所措。以后进高校,哪怕你有好文章也是会四处碰壁嘛?想问问过来人的经验。
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PCR有产物但是电泳无结果
PCR后用紫外分光测定DNA含量都在450-500ug/ul,但电泳无目的片段的条带,内参也没条带。电泳中maker能跑出条带,用引物也点了样,引物的条带稍模糊但还是有,请问是哪里出了问题?
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