第二章:4 分钟教你学会多重 PCR 引物设计
多元 PCR (多重PCR,Multiplex PCR,MPCR) 是指在一个 PCR 反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的 PCR 反应。这项技术非常有用,他不仅可以提高 PCR 的产率还能提高 DNA 样品的利用率。另一种形式的 MPCR 是组合 PCR, 组合 PCR 是在同一 PCR 反应中使用几个不同的模板和几对引物。多元 PCR 和组合 PCR 往往被当作同义词使用。设计策略MPCR 要求所有的引物对在同一条件下扩增其各自的特异序列。大多数多元 PCR 反应 局限于扩增 5~10 个目的片段,原因之一 ...
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核酸吸光度、分子量、摩尔浓度之间的相互换算及引物浓度的确定
光度计测量的转换:双链DNA (ds DNA):A260 = OD260 = 1 相当于50 µg/ml溶液单链DNA(ss DNA):A260 = OD260 = 1相当于33 µg/ml溶液RNA:A260 = OD260 = 1相当于40 µg/ml溶液参考文献:Freifelder, D., Physical Biochemistry: Applications to Biochemistry & Molecular Biology, W.H. Freeman and Company, CA, 1982, p. 494-536.核酸分子量计算方程式:吸光度 . ...
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PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求,并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应(polymerase chain reaction)即PCR技术,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA 序列的方法,故又称基因的体外扩增法。PCR技术已成为分子生物学研究中使用最多,最广泛的手段之 ...
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简并引物设计方法及原则
简并引物常用于从已知蛋白到相关核酸分子的研究及用于一组引物扩增一类分子。简并引物设计方法(1)利用NCBI搜索不同物种中同一目的基因的蛋白质或cDNA编码的氨基酸序列 因为密码子的关系,不同的核苷酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的,所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统,查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTP(通过蛋 ...
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