PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾 现象:产物在凝胶上呈Smear状态。 原因: 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策: 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度 6.减少循环次数 假阳性 现象:空白对照出现目的扩增产物 原因: 靶序列或 ...
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验证引物
我做heparanaser的RT-PCR,请各位帮助验证引物cDNA序列为:1 atgctgctgc gctcgaagcc tgcgctgccg ccgccgctgc tgatgctgct gctcctgggg61 ccgctgggtc ccctctcccc tggcgccctg ccccgacctg cgcaagcaca gcaggacgtc121 gtggacctgg acttcttcac ccaggagccg ctgcacctgg tgagcccctc gttcc ...
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引物(primers)设计知识介绍
引物(primers)引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。引物的重要性在整个PCR体系中 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合,不与其他非目的DNA结合,PCR的灵敏性要求DNA聚合酶能对引物进行有效的延伸,可见引物设计好坏与PCR结果密切相关。& ...
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手把手教你在线做PCR引物设计(不需要下载任何软件)
POST by Bingsen Xu前言:我是刚刚注册到丁香园,在PCR技术讨论版看见置顶贴,“请求助引物设计的战友先进来这里!”稍微浏览了一下,发现很多朋友对PCR引物设计还不是很熟悉,我愿意把自己积累的一点引物设计方面的经验和大家分享,希望不会做引物设计的朋友看完之后,可以不用再发求助贴而是自己动手做引物设计或者引物检验。开始之前:其实非常简单,不需要你下载任何软件,但是你得有一台电脑能上网。当然,最重要的是,你要很清楚 ...
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