【经验】PCR实用技巧
增加PCR的特异性:1. primers design这是最重要的一步。理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列 退火的引物要符合下面的 一些条件:a.足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b. GC% 40%~~~~60%c. 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d. 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GCe. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMERf. 避免3 . ...
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PCR实验中DNA聚合酶的选择及实验方法
一、DNA聚合酶的选择实验室常用DNA聚合酶有三种:TaKaRa TaqTM,TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymerase。TaKaRaTaqTM是一般的DNA 聚合酶,保真性较差,但价钱便宜,一般用于基因表达的检测等。TaKaRaEXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐热性 DNA聚合酶,具有一定的保真性,而 ...
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PCR 引物设计及软件使用技巧
自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来,PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一,而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败:表现为扩增出目的带之外的多条带(如形成引物二聚体带),不出带或出带很弱,等等。 现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页,得到设计好的引物,也可以在本 ...
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原位PCR的概念及原理
原位PCR是指直接在细胞或组织材料标本上原位扩增目的DNA或RNA片断(不改变靶基固定位),并在原位检测其扩增产物的技术。
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