PCR临床应用领域及特点
一、PCR应用特点1、操作简便目前PCR技术采用耐高温Taq DNA聚合酶,并且在有电脑控制的DNA扩增仪中进行,使操作大为简化,一次加入的酶即可满足反应全过程。DNA扩增仪能自动迅速升降温度,只需把反应所需的全部材料混匀,置入仪器内,反应便依所输入的程序进行。2、省时应用TaqDNA聚合酶时,单核苷酸掺入速率较高,75~80℃时,每个酶分子每秒钟可完成150个核苷酸的合成。PCR每一周期需数 ...
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PCR-引物设计原则
PCR-引物设计原则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3. ...
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PCR实验技术总结
PCR技术简史一、PCR的最早设想核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。二、PCR的实现1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具 ...
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原位检测技术
原位检测技术就是利用某些物质(如抗体、酶、核酸探针、凝集素等)将某一分子从细胞或组织内的众多生物分子中挑选出来,然后通过特异性酶反应显色或荧光显示等测定此分子在细胞组织原有位置上的分布范围和凝集程度,以判断此分子在细胞组织内的生理效应和病理意义。
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