重组子的筛选和鉴定
重组子可通过酶切进行鉴定,也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定,阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中,37℃摇 床培养过夜。2. 次日取菌液 0.2-0.5ml,13000rpm×3min 离心,弃上清,加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿,震荡混匀, ...
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重组质粒的筛选与鉴定
摘要: 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双抗生素对 ...
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重组质粒的转化、筛选和鉴定操作
摘要: 学习克隆工作中最常用的双酶切将外源基因与质粒连接方法及操作技术. 一、实验目的:1、学习克隆工作中最常用的双酶切;2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术;3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术;4、了解细胞转化的概 ...
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转染细胞的稳定筛选
1.确定抗生素作用的最佳浓度: 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性,因此在筛选前要做预试验,确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。①提前 24 小时在 96 孔板或 24 孔板中接种细胞 8 孔,接种量以第二天长成 25%单层为宜,置 CO2 孵箱中 37℃培养过夜。② 将培养液换成含抗生素的培养基, 抗生素浓度按梯度递增0(50 100 200 400 600 ...
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