重组子的筛选和鉴定
重组子可通过酶切进行鉴定,也可以利用扩增引物通过 PCR 进行鉴定,阳性重组子能切出所需要的片段或得到相应片段的 PCR 产物。1. 用牙签挑取平板上的菌落接种于 2ml 含适当抗生素的 LB 培养基中,37℃摇 床培养过夜。2. 次日取菌液 0.2-0.5ml,13000rpm×3min 离心,弃上清,加入 20μl ddH2O 和 20μl 酚/ 氯仿,震荡混匀, ...
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重组质粒的筛选与鉴定
摘要: 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双抗生素对 ...
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重组质粒的转化、筛选和鉴定操作
摘要: 学习克隆工作中最常用的双酶切将外源基因与质粒连接方法及操作技术. 一、实验目的:1、学习克隆工作中最常用的双酶切;2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术;3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术;4、了解细胞转化的概 ...
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感受态细胞的转化实验流程
1. 取 100μl 感受态细胞于冰浴上融化。2. 加入 1μl 纯质粒或连接产物,轻轻吹打混匀,冰浴 30 min。3. 将菌液放入 42℃水浴中热激 90 秒,立即放入冰浴中 2 min。4. 加入 0.9ml SOC,于 37℃恒温摇床上 200rpm×1hr 温育。5. 将菌液 4000rpm/min 离心 3min,留 200μ l 上清将菌体打散 ...
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