关键词: S1 核酸酶 保护实验
来源: 互联网
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一、材料准备
5. 重悬沉淀,在5 μl 的水混合。
二、实验步骤
1. 共沉淀物的RNA + 1E4 cpm的探针,通过调整最终体积至100 μl,0.3M的醋酸钠和盐。加入250 μl 乙醇。
4. 涡蓬勃发展。
5. 孵育,100℃,3分钟。
8. 在37摄氏度下孵育45分钟。
9. 加入1微升糖原(20 mg/ml),500 μl 的EtOH中,在冰上沉淀15分钟。
10. 4摄氏度旋转30分钟。
12. SpeedVac离心,加入5 μl 甲酰胺上载染料(5X TBE,45%甲酰胺,0.25%溴酚蓝)。煮沸3分钟,并放置在冰上。
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RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
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siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
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