关键词: 多基因敲除 LncRNA 敲除 CAS9
来源: 吉凯基因
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我们都知道基因剪刀 CRISPR/CAS9 技术今年大火,之所以这个技术这么火和其对基因操作的方便性,高效性,准确性及高性价比是分不开的。CRISPR/Cas9 是一种能够对任何物种基因组的特定位点进行精确编辑的技术。
其原理是核酸内切酶 Cas9 蛋白通过导向性 RNA (guide RNA, gRNA) 识别特定基因组位点并对双链 DNA 进行切割。一旦 DNA 链被切开后就能对特定基因引入敲除、敲入、突变等编辑。
然而基于传统的 sgRNA 载体的 CRISPR-CAS9 技术,由于仅靶向一个位点,所以更适合单个编码基因的敲除,对于多个编码基因和非编码基因则需要同时导入多个 sgRNA 载体/病毒,使操作难度上升不小。
为解决多个编码基因同时敲除和 lncRNA 敲除的需求,Multiplex sgRNA 技术应运而生Multiplex sgRNA system 可同时插入不同的 sgRNA,帮助解决同时敲除多基因或非编码基因编辑的需求。可以同时插入 2~5 个 sgRNA 符合不同的实验需求。针对多个编码基因其敲除策略可以为:
对于通路研究的同学来说,有时需要同时抑制多个通路,而通路抑制剂还是蛮贵的,如果有了可靠的通路关键基因的 sgRNA 序列,那就可以像通路抑制剂一样使用 CRISPR/CAS9 技术来同时抑制多个信号通路了,大大提高了性价比。
对于 Car-T 研究的同学来说,编辑 T 细胞制作 UCAR-T 的时候需要同时敲除多个检查点基因使得 CAR-T 细胞标准化和可量产化,这时同时导入多个 sgRNA 就可以方便的满足这一要求。还有其他苦于类似特殊高实验要求的同学们的福音来啦,吉凯基因已经推出了 Multiplex sgRNA system,只要一个 sgRNA 载体,同时插入最多 5 个 sgRNA 靶点,符合最多 5 个基因和 2 个 lncRNA 的敲除工作,是不是感觉棒棒哒!
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RNA抽提后出现奇怪情况
按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
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siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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师兄师姐好,我第一次做提取RNA的实验,不知道最后用DEPC水溶解样品时,用多少的DEPC水呢?
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