引物延伸分析(primer extension analysis)
引物延伸分析(primer extension analysis)主要用于mRNA 5′端作图。poly(A)+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交,然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRNA 5′端作图方面具有下述优势:一旦引 ...
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MTT 经验总结
总结了丁香园上各位战友的经验,并且总结了sigmaMTT试剂盒和MTT试剂的资料。想进一步交流可以加我的个人微信号:babagowhere。MTT原理:MTT是一种检测细胞功能的方法。细胞在活化增值的过程中,线粒体的能量代谢能够把MTT代谢为蓝紫色的甲臜,甲臜沉积于细胞内或细胞周围,形成甲臜的量与细胞活化的程度成正比,通过盐酸异丙醇或其他溶剂溶解甲臜,用酶标仪测溶液的光密度就可以反映甲臜的量并从而判断细胞活 ...
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荧光共振能量转移
(Fluorescence Resonance Energy Transfer, FRET)技术在活细胞生理条件下无损伤的研究蛋白质-蛋白质间相互作用》FRET基本原理荧光共振能量转移是指两个荧光发色基团在足够靠近时,当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到更高的电子能态,在该电子回到基态前,通过偶极子相互作用,实现了能量向邻近的受体分子转移(即发生能量共振转移)。下面以GFP的两个突变体CFP(cyan fluorescent pr ...
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[资料] 绿色荧光蛋白GFP特性及应用
绿色荧光蛋白GFP来源及生化特性: GFP 主要来自两种海洋无脊椎动物,西南太平洋水母———Aequorea victoria 和佐治亚沿海水域的三色堇———Renilla renifomis 。上述来源的GFP ,其原始发光蛋白基团具有将蓝色的化学发光演变为绿色荧光的生物发光特性。Plinythe Elder 于公元1 世纪最早报道了这种生物发光现象。20 世纪60 年代以来,Blinks 等实验室先后研究了GFP 的生物化学特性。野生型GFP (wt2GFP) 的分子 ...
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