关键词: 琼脂糖 核酸电泳
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1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;
2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml) ;
3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料,轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固;
4. 室温下 30~ 45 分钟后凝胶完全凝结, 小心拔出梳子, 将凝胶安放在电泳内槽;
5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面 1mm 为宜,如样品孔内有气 泡,应设法除去;
6. 在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液(loading buffer) ,混匀后,用枪 将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内;
7. 接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA 样品由负极往正极泳动 ( 靠近加样孔的一端为负) 。一般 60~100V 电压,电泳 20~40min 即可;
8. 根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳;
9. 电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子 量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。
琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA的最佳分辨范围
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小树洞:你们工作后第一个月都得了多少工资呢?
妇产专硕18年刚毕业,四证合一。找了个市级三甲医院,合同的。工作一个月,当时发工资,968元。之前应聘的时候说前三月试用期1300 元。试用期过后加奖金,没想到,呵呵,租房一月1000元。今天直接崩溃。打算明天打电话问财务扣的都是什么钱,了解清楚后闪人。回家继承祖业—烤地瓜,烤玉米走起。你们工作后第一个月都得多少工资呢?
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用奶粉或者BSA配好的一抗/二抗可以在—20度保存多久?大约几个星期还是一两个月?
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