关键词: Gateway技术 克隆 表达 新方法
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Gateway技术提供以下可能: 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间
同时将您的基因转移到多个表达系统
在任何您选择的系统――体外,细菌,酵母,昆虫,或哺乳动物――分析表达
一、一种更好的克隆方法
Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统(图1)。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤,而同时典型的克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时,还可以保证正确的方向和阅读框。Gateway也有助于进行带不同数目纯化和检测标签蛋白的表达。
图1 Gateway技术的灵活性
目的基因克隆进入门载体后,可以同时转移目的基因到多个目的载体。
Gateway利用了位点特异重组,所以在构建入门载体后,不再需要使用限制性内切酶和连接酶。一旦您拥有了一个入门克隆,就可以多次使用它,转移您的目的基因到Gateway改造过的各种表达载体(目的载体)。
此外,由于在重组时DNA片段的阅读框和方向保持不变,因而您不必再为新的表达克隆测序担心。在使用每一种新的表达系统时,将会节省您更多的时间。
二、一项强大而可靠的技术
Gateway技术是克隆和亚克隆DNA序列的一项新颖的通用系统,便于功能基因的分析和蛋白质的表达。一旦进入这个多功能的操作系统,DNA片段可以通过位点特异的重组在载体之间转移。
Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统(attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成了Gateway技术(表1和图2)。BP反应是利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。
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