Southern印迹杂交(Southern blot)是1975年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术,在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。
早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后,经
毛细管的虹吸作用,转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法;滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜(如APT、ABM纤维素膜)等。利用Southern印迹法可进行
克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片断长度多态性分析(RFLP)等。
Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定
核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸
同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。该技术是1975年
英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的,Southern印迹杂交故因此而得名。
Southern印迹杂交技术是
分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按
碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合
凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图,或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的特殊要求,还必须掌握DNA分子中基因编码区的大小和位置。有关这类数据资料可应用Southern印迹杂交技术获得。
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用
琼脂糖凝胶电泳分离经
限制性内切酶消化的
DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至
尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记
探针进行
杂交,用
放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
地高辛southern印迹杂交显色图片