1、合成 5‘-AATTC GATATC NNN GGTACC NNN CTCGAG NNN AAGCTT G -3' 3'- G CTATAG NNN CCATGG NNN GAGCTC NNN TTCGAA CC TA G-5'
EcoR I粘末端 EcoRV Kpn I Xho I Hind III BamH I粘末端 ; (这里面有几个要点,合成时直接合成粘末端,省得再切,这样既省合成的钱,效率又高,如果你需要在改造后的载体继续使用原载体的连入切点,比如上面例子的EcoR I和BamH I,你像例子中一样可以合成完整的酶切位点粘末端,如果你不想使用它们,那就只合成粘末端,比如上面那个例子,应合成5-AATT GATATC ……和3’-CTATAG ……这样连接后,EcoR I切点就被封闭了;再有要注意考虑连入位点之间要留一定的间隔,因为靠着的两个酶是很难双切开的,有时候分步切都没用,因为留给酶结合的空间太小,没法结合l ,一般按照相邻两个酶的推荐保护碱基数中较大的数目留,万无一失啊)