标签: 细胞凋亡 Caspase-3 活性检测
细胞凋亡中Caspase-3活性的检测主要应用于(1)酶的活力测定(2)细胞凋亡指标检测。
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1、收集细胞;
2、PBS洗涤;
3、抽提细胞裂解液;
4、蛋白定量;
5、SDS-PAGE电泳,硝酸纤维素膜或PVDF膜转移,5%脱脂奶粉封闭,室温1.5——2h或4°C过夜;
6、Caspase-3多抗或单抗室温反应1——2h或4℃过夜,TBS-T(含0.05% Tween 20的TBS)洗3次,5——10min/次;
7、HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1——2h→ TBS-T洗3次, 5——10min/次;
8、ECL显影或NBT/BCIP显色。
2.反应完毕后尽快在一小时内检测。
1. 结果采用Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及对底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]等的裂解。
2. 此外还有荧光分光光度计和流式细胞术分析法。
流式细胞仪可以检测caspase3吗
我们采用提取RNA,然后反转录做real-time pcr,未检测到caspase3基因表达上调,请问若用流式细胞仪检测是否会灵敏些呢?
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