标签: 痛行为学 神经生物学实用实验技术第四章第八节
来源:《神经生物学实用实验技术》第四军医大学出版社
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痛觉过敏包括机械和热痛觉过敏。机械痛觉过敏通常指引起轻微刺痛的机械性刺激引起的强烈持续性痛觉,即是说对机械痛刺激的反应强度明显增大。
实验测试时,把动物放置在一个具有高架金属网格底板的透明容器内,然后用一根刺针触压后肢足底部,仅引起局部皮肤微凹并不刺入皮肤。在正常动物该刺激仅引起幅度很小的短时程(通常小于0.5s)缩足反射。该刺针加在人的腕部手掌皮肤仅感觉到短刺痛。但在神经病理痛动物则产生大幅度的长时程缩足反射,常伴有舔足行为。一种简便的方法只需记录该反射持续的时间足以评估机械痛敏的程度。这种情况在患者身上常诉说针刺后产生强烈的持续性疼痛。热痛觉过敏是受累皮肤的热痛阙值显著降低或者热痛反应程度显著增强。在动物身上检测热痛敏,通常采用Hargreaves建立的热痛缩腿潜伏期检测法。将被测大鼠放置在有机玻璃罩内,底部为一厚度为2mm的玻璃板。待动物适应检测环境,处千相对静止状态时,将一聚焦热光束投射到欲检测的后肢足底,自动计算开始光照到出现缩足反应的潜伏期。每次照射间隔5min,取5次照射平均值。目前国内外均有现成的装置供应。这一方法尽管简便,也易受多种因素的影响,例如检测室与玻璃板的温度,动物适应检测环境的程度,光点照射足底的位置、范围、次数以及测试者的意向等,应给予充分注意。
主要介绍福尔马林诱导的条件位置回避(formalin induced conditioned place avoidance, F-CPA)。
测量装置由穿梭箱和记录系统两部分组成。穿梭箱由三个不透明的室构成。两个较大的室(30cmx30cmx30cm)作为条件室(A室、B室)并排放置,两室之间有10x10cm的门相通。第三个较小的(15cmx20cmx30cm)为中性选择室(C室),置于两个条件室的前方,有两个门(10cmx10cm)分别与A、B室相通。两个条件训练室A和B在视觉、触觉和嗅觉信息上有着显著差异。A室壁上为黑白相间的纵型条纹,底板为粗糙塑料薄板,室内滴1%醋酸溶液作为气味剂。B室壁上为黑白相间的横条纹,底板为光滑的塑料薄板,室内滴1%的桂皮浸液作为气味剂。C室内壁灰色,没有特殊的标记,亦没有特殊气味剂。整个条件训练箱放置于透气性良好的外箱中,外箱顶部两侧装有灯,以保证训练室的光照一致、不受外界干扰及保持恒定,外箱顶部正中装有摄像头,能够随时观察大鼠的活动。自动运动记录系统在A、B两室的底座下面,各有一个称重传感器。当大鼠踏入,传感器将机械能的变化转变为电信号,后者一方面将信号输入一个自动计时器,用以记录大鼠在该室停留的时间,同时,大鼠活动信号采集后输入计算机,用软件记录分析。行为训练共4d。第1天,熟悉环境兼测试。将A、B两室之间的门打开,关闭C室和A、B两条件室之间的门。将大鼠放于C室,2min后打开通向A、B室的门,大鼠自由选择进入A室或B室。之后,将C室与A、B室之间的门关闭,使大鼠可以在A、B两个条件室之间自由活动。计时器将自动记录20min内大鼠分别在两室停留的时间。第2天,将所有门关闭。大鼠不做任何处理,将其随机放入A室或B室自由活动45min,该室称为非条件刺激匹配室(unpaired)。第3天,仍然关闭所有的门,大鼠右后足底皮下注射5%福尔马林50µL后,放入另外一个条件室45min,该室称为条件刺激匹配室(paired)。对照组大鼠足底注射等量的生理盐水。第4天,与第1天一样,测试20min大鼠分别在非条件刺激匹配室(unpaired)与条件刺激匹配室(paired)室内的停留时间。
CPA指标由以下公式计算。CPA index={paired/(paired+unpaired)}xl00%该方法目前运用较广泛,操作简单,结果稳定,是研究急性炎性痛厌恶情绪的主要方法,但不能用于神经病理性痛厌恶情绪的研究。
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