标签: 碱 氯甲苯 水解 活化 固定化 酶学实验手册第五章
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用这种方法酯键通过碱的处理被部分水解,用溶在丙酮中的对甲苯磺酰氯化物来活化,用羧基或羟基固定化酶到这个残基上(图 1)。
图 1 通过氯化物的活化酶固定化到聚酯上
实验所需「试剂」具体见「其他」
1. 通过氯化物的碱解和活化
聚酯小片(每片 2 cm2,10 片)在室温 10 ml 10%(质量浓度)NaOH 中孵育 10 min,其后聚酯在玻璃料上被充分冲洗和吸干,用水冲三次,再用丙酮冲五次,每次 10 ml。
冲洗后尚未干,小片立即转移到 10 ml 溶有 100 g/l 甲苯磺酰基氯化物的丙酮中孵育 20 min。其后在玻璃料上用丙酮冲洗三次、水冲洗三次、pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸钾两次,每次 10 ml。
2. 酶的固定
冲洗之后迅速添加酶溶液(大约 10 ml,聚酯小片必须完全沉浸)并在 4℃ 温和的摇动中过夜。未结合的酶在吸滤器或玻璃料上先用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸钾冲洗,再用 pH 7.5 0.1 mol/L 磷酸钾来冲洗,其后,储存在缓冲液中,为了储存更长的时间,可用水冲洗去除聚酯小片上的缓冲液,并在空气中干燥。
试剂:
0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾
溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸钾
100 g/L NaOH
丙酮
溶有 100 g/l 对甲苯磺酰氯化物(Mr=190.7)的丙酮
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