标签: MBS 半乳糖苷酶 抗体 结合 酶学实验手册第三章
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实验所需「试剂」具体见「其他」
在 1 ml 抗体溶液中加入 1 ul MBS 溶液,25℃ 放置 1 h。未结合试剂由交联葡聚糖 G-25 色谱柱除去,用缓冲液洗脱。立刻在收集的蛋白质组分(280 nm 下测定吸收值)中加入 2 mg β-半乳糖苷酶,30℃ 下放置 1h。用 50 ul/ml 0.1 mol/L 二硫丁四醇停止反应。
试剂:
MBS 溶液(3-来酰亚胺基苯酰-N-羟基丁二酰亚胺酯,Mr=314.3;20 mg/ml 二氧六环)
抗体溶液(IgG,1 mg/ml 溶于 0.05 mol/L NaCl,0.1 mol/L 磷酸二氢钾 pH 7.0)
β-半乳糖苷酶(来自 E.coli)
交联葡聚糖 G-25 色谱柱,约 1 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸二氢钾平衡
10 mmol/L MgCl2,50 mmol/L NaCl
1 mol/L 2-巯基乙醇(Mr=78.1;0.78 g/10 ml)
0.1 mol/L 二硫丁四醇,(DTE,Mr=154.2,154 mg/10 ml)
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