标签: 细胞内记录 神经生物学实用实验技术第三章第三节
来源:《神经生物学实用实验技术》
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膜电位的记录需要在细胞膜的两侧各放置一个电极形成一个环路,因此将一个电极插入细胞膜内进行相应电特性的记录时,这种记录方法即为细胞内记录法。使用该方法可以准确测量膜电位的绝对值,还能测定兴奋性突触后电位、抑制性突触后电位及动作电位
1.配制实验所需生理盐溶液和电极内液。
2.根据具体实验要求,制备在体或离体的标本。
3.固定标本,使其处于一定机械稳定状态。
4.拉制形状、尖端合适的记录电极,并充灌内液。
5.将固定好的微电极采用步进方式,逐渐接近并插入细胞内部。
6稳定记录膜电位,并进行刺激-反应测试等相关指标的观察。
7一般细胞的典型膜电位数值为-80--60mV,在动作电位发生期间,这一数值可以达到40mV(图3-2)。
1微电极放大器的场效应管属千高敏感装置,使用过程中一定要避免静电荷积累使其击穿。记录所需电极应为硬质硅玻璃管,内置细芯,拉制成的电极尖端可达一定细度,又具有相当的硬度,足以刺入细胞。记录过程中,电极到达组织或细胞表面时,会看到阻抗的变化,此时,要将记录归零(相当于胞外电极调零),以便刺穿进入胞膜的电极准确反应膜电位的变化。
1. 细胞内记录对于标本的稳定性要求极高,这一要求在在体情况下`更难以达到。实验中,为尽量使记录稳定,可以采取如下措施:
① 加强动物固定,视记录的部位,对于头部和脊柱等骨质结构均应有相应固定措施;
②动物在自然状态下,其随意运动会造成电极与记录细胞的相对位移,而使记录不能长久稳定,为减少动物运动造成的不稳定,可以使用肌肉松弛剂(如箭毒)减少动物的运动;
③使用肌肉松弛剂后的动物必须给予人工呼吸,确保其呼吸、循环状态的良好,同时呼吸的潮气量要调节适当。
2.电极穿透脂质双分子层细胞膜的过程中,有时需要对其位置进行略微调整,以便电极与细胞的相对位置处于最佳状态,保证长时间稳定记录。同时,电极进入细胞后,不要立即进行去极化刺激,而需要给予一定强度的超极化电流,使膜电位稳定在较静息值略超极化的范围持续几分钟,所谓“养细胞”。
3.由于微电极的电极电阻很大,因此实验中一定要进行电极电阻补偿,以真实反应膜电位的变化。
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