标签: ATPase ATP磷酸水解酶 酶学实验手册第三章
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ATP → ADP+Pi
很多 ATP 酶是与膜组分联系在一起的酶,比如氧化磷酸化或离子转运系统。在细胞匀浆中或膜悬浮物中必须测定它们的不溶性。
在 37 ℃ 下轻轻地振荡培养 1 ml 含有 5~20 ul 膜悬浮物样品的实验混合物,并在一定的时间内(1 min、5 min、10 min,取决于酶活力)停止振荡加入 1 ml SDS 溶液。无机磷酸的生成量根据磷酸定量方法来测定,用 1 min 生成的磷酸的物质的量(umol)来计算酶活力。
0.1 mol/L TES-Tris,pH 7.5[N-tris(羟甲基)甲基-2-氨乙基磺酸,Mr=229.3;3.44 g 溶于 100 ml,用 0.2 mol/L 的tris(羟甲基)氨基甲烷(Tris,4.84 g 溶于 200 ml)调节 pH 到 7.5,到 200 ml]
0.1 mmol/L ATP(二钠盐,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mmol/L MgCl2(MgCl2·6H2O,Mr=203.3;203 g 溶于 10 ml 水中)
BSA 溶液,100 mg 溶于 100 ml
10%(质量浓度)十二烷基硫酸钠(SDS)
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