标签: α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶 麦芽糖酶 酶学实验手册第三章
α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶,麦芽糖酶。从末端切断α-D-葡萄糖的非还原的1,4键相连的α-D-葡萄糖残基。对于实验,麦芽糖分成两个葡萄糖,这是从己糖激酶的反应中测得的,而己糖激酶(HK)的反应又与葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6PDH)相偶联。来源:《酶学实验手册》
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实验所需「试剂」具体见「其他」
实验混合物:
0.01 ml 酶样品
25℃时,培养 5 min,将反应试管移入水浴中或加热箱中来停止反应。取 0.1 ml 等分试样检验葡萄糖。
0.1 mol/L 乙酸缓冲液 pH 6.0,包含 1.5 mmol/L EDTA[5.7 ml 乙酸,100%,Mr=60,溶于800 ml H2O,加入 560 mg EDTA·Na2·2H2O(Mr=372.2),用 1mol/L NaOH 调至 pH 6.0,补充至 1 L ]
0.5 mol/L 麦芽糖溶液(一水合物,Mr=360,8 g 溶于 100 ml 水中)
0.98 ml 的实验混合物
0.01 ml 己糖激酶
25℃ 时,于 340 nm 处吸收值上升。ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
计算
试剂:
100 mmol/L 三乙醇胺-HCl/NaOH,pH 7.6(三乙醇胺-HCl,用 NaOH 调节)
1.0 mol/L D-葡萄糖(Mr=180.2;18 g 溶于 100 ml 水中)
0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L NADP(二钠盐,Mr=787.4;79 mg 溶于 10 ml 水中)
6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH,商品为 100~500 U/mg,应该准备约 5U/0.1 ml 的稀释液)
己糖激酶(HK,约 200U/ml)
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