标签: 脂质染色 免疫组织化学实验技术及应用 第十五章
脂质是中性脂肪、类脂以及它们的衍生物总称,脂类物质简称脂质,包括脂肪和类脂。组织选用甲醛固定或不经过固定,而直接进行的冰冻组织切片,经脂质染料与低浓度乙醇混合后形成饱和溶液,能够较好地与脂质进行结合着色。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》
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油红 O-乙醇染色液:油红 O(oil red O,上海试剂三厂)2.5 g,70% 乙醇 500 ml,混合后间隔摇动多次,待 24 h 形成饱和液,即可使用。置室温中可保存较长时间。
1. 将切好的 15~20 μm 左右的冰冻切片,用弯钩玻璃棒在 70% 乙醇内稍洗。
2. 浸入 5 ml 染色缸的油红 O-乙醇染色液中 15 min。
3. 70% 乙醇中浸洗 1 min,蒸馏水浸洗 2 次。
4. 将漂浮的切片浸入蒸馏水中 2 min,用玻璃棒捞贴于载玻片上。
5. 将切片斜放于插板上,除去多余的水,进行甘油明胶封固。
1. 使用油红 O-乙醇染色液时应倒取清液,不能摇动试剂瓶。
2. 载玻片上的着色组织不得干燥后封固,以免影响染色效果。
结果:脂质呈红色,背景无色。
苏丹 III 染色液:苏丹 III 2.5 g,70% 乙醇 500 ml,充分溶解后,室温下形成饱和溶液,可存放较长时间。
1. 冰冻组织切片厚 10~20 μm 左右,采用漂浮法染色(同油红 O 染色)。
2. 蒸馏水洗后,用 Harris 苏木精液作用 1 min。
3. 自来水洗后,再用 0.5% 盐酸乙醇液分化至细胞核变蓝。
4. 浸入苏丹 III 染色液中 30 min,70% 乙醇分化数秒钟,浸入蒸馏水内轻洗。
5. 用弯钩的玻璃棒捞贴于载玻片上,待稍晾干后,及时用甘油明胶封固。
1. 苏丹 III 染色液的量必须充足,每次染色后,不能重复使用。
2. 核使用苏木精染色液,必须淡染色,才能对比清晰。
结果:脂质呈橘红色,细胞核呈淡蓝色。
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