由于在酶标记抗体过程中,酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性,从而降低了抗体的效价。另外,血清中的非特异性抗体也可以被酶标记,这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合,放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点,Sternberger(1969)在酶标抗体法的基础上,创建了非标记抗体免疫酶技术。该方法先用酶(HRP或AKP)去免疫动物(羊、兔和鼠等),使其产生高效价、特异性的抗酶抗体,再将该抗酶抗体与酶结合,形成五环的复合物,例如PAP(HRP)、APAAP(AKP)、OAGO(GO)复合物。该复合物由于没有一个抗体受到共价键的标记,保留了免疫活性,相对分子质量较小,对细胞的穿透性好。该技术主要有酶桥法和过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)复合物法,以及一些变型的方法。特别是PAP法大大提高了检测的敏感性,且染色背景轻,稳定性好,得到了广泛应用。内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》
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