将上述一级种用无菌接种铲铲下约 0.5 cm2 的菌块至装有 50 ml 玉米粉蔗糖培养基的 250 ml 三角瓶中,26~28℃ 静止培养 2 d,再置旋转式摇床,同样温度,150~180 r/min,培养 3 d。静止培养,促使铲断菌丝的愈合,有利于繁殖,大规模菌丝生产,一般都进行二级摇瓶神子培养。
若系作为固体栽培的种子,则在菌丝球数量达到最高峰时(3 d 左右),放入 10 颗左右灭菌玻璃珠,适度旋转揺动 5 min、10 min 均质菌丝,将这种均质化的菌丝片断悬液作为接种物(或用匀浆器,均质一定时间)。取 1 ml 涂布在酵母裔麦芽汁琼腊平板上,重复 3 份,置 28℃ 培养 3 d 后计算菌落数作为菌丝断片成活试验。
采收后,瓶口内如有杂物或死菇等要清除掉、再包上牛皮纸,继续培育。约 10 d 左右,瓶口的料面上又会发出小菇蕾,再打开牛皮纸继续进行湿度、温度、通风和散射光的管理,大约 7~10 d 又会出现一批菇蕾。第二批菇釆光后,料内水分、养分消耗太多,此时应补水和追加营养硫酸铵酒石酸溶液,浸没在该溶液中一昼夜,挤干水分,再包上牛皮纸,很快又能出第三茬菇。每次采下的鲜菇即称重量,总量按公式计算生物学效率(一定含水量于实体鲜重/基质干重 ×100。)三荏菇以后,菇潮不能再成批出现,而是变成零星发生了。