标签： 单个核细胞 分离 微生物学实验第三版第十三章
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体外测定免疫细胞的数量和功能常需将某种免疫细胞首先分离出来。本实验是采用密度梯度离心法分离单个核细胞（mononuclear cell）。单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 血液中各种细胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分离液使不同比重的细胞在离心沉降过程中按相应密度梯度分布，从而达到分离各种细胞的目的，入单个核细胞的比重为 1.075～1.090，而红细胞、粒细胞等的比重在 1.092 左右，因此，将血液轻轻加在比重为 1.076～1.078 的分离液上，使成一界面，再经离心，即出现分层，最上面为血浆层，界面处有一白色云雾状细胞层即为淋巴细胞和单核细胞，而红细胞和粒细胞则沉于管底。分离液的比重受温度变化的影响，实验应在室温（20 ℃）下进行，若实验时，室内温度低于 20 ℃ 则先将分离液在 37 ℃ 水浴中高于 20 ℃ 的夏季，得率可能偏低。
1. 加淋巴细胞分离液 2 ml 于圆底试管中。
用吸管直接伸入试管底加入，以防分离液沾上试管壁。
2. 于另一试管中，加静脉抗凝血（每毫升血加 20 单位肝素）2ml，再加等量 Hanks 液将血液稀释。
3. 用毛细吸管将此抗凝稀释的血液沿管壁徐徐加入分离液试管中，使与分离液形成一界面，两者不能混合。
4. 离心
室溫（20 ℃）下于水平离心机中，2000 r／min 离心 20min。
5. 取出试管，此时可见试管内已分层，用一毛细吸管插入界面白色细胞层，吸出细胞，移入另一试管内。
6. 加入 1 ml Hanks 液，悬浮细胞。
7. 制片
7.1 取一滴细胞悬液于一干净载玻片的一端，用另一边缘光滑的玻片按「吞噬作用」实验的方法推片。
7.2 干燥、固定 于空气中自然干燥，然后用 95％ 甲酵固定 2 min。
7.3 染色将涂片浸于 0.25％ Jenner 染液中 5～10 min，再移到 1：20 Giemsa 染液中 20min，用水冲洗。
7.4 脱色 用 95％ 乙醇脱色 30 s，水冲洗。
8. 镜检
干燥后，在显微镜下观察单个核细胞的形态。若观察到细胞着色太蓝，可再脱色 30 s。
淋巴细胞分离液为什么可以区分PBMC和血细胞？
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PBMC与肿瘤细胞共培养时，PBMC要如何预刺激？如果是用CD28包被的话是怎么包被的？
线粒体膜电位
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