标签: 大分子 微生物 水解 微生物学实验第三版第十章
微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖;脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸;蛋白酶水解蛋白质为氮基酸等。来源:《微生物学实验(第三版)》
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淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖的过程可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实:淀粉遇碘液会产生蓝色,但细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色,表明细菌产生淀粉酶酶。
1. 将固体淀粉培养基溶化后冷至 50℃ 左右,无菌操作制成平板。
2. 用记号笔在平板底部划成四部分。
3. 将枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌分别在不同的部分划线接种,在平板的反面分别在四部分写上菌名。
4. 将平板倒置在 37℃ 温室中培养 24 小时。
5. 观察各种细菌的生长情况,将平板打开盖子,滴入少量 Lugol's 碘液于平皿中,轻轻旋转平板,使碘液均匀铺满整个平板。
如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已被水解,为阳性,透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱,即产生胞外淀粉酶活力的高低。
脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的 pH, 使 pH 降低, 加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色变为深红色,说明胞外存在着脂肪酶。
2. 用记号笔在平板底部划成四部分,分别标上菌名,
3. 将枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,钢绿假单胞菌分别用无菌操作划十字接种于平板的相对应部分的中心。
4. 将平板倒置,于 37℃ 温箱中培养 24 h。
5. 取出平板,观察菌苔颜色,如出现红色斑点,说明脂肪水解,为阳性反应。
微生物可以利用各种蛋白质和氨基酸作为氮源外,当缺乏糖类物质时,亦可用它们作为碳源和能源,明胶是由胶原蛋白经水解产生的蛋白质,在 25℃ 以下可维持凝胶状态,以固体形式存在。而在 25℃ 以上明胶就会液化,有些微生物可产生一种称作明胶酶的胞外酶, 水解这种蛋白质,而使明胶液化,甚至在 4℃ 仍能保持液化状态。
1. 取三支明胶培养基,用记号笔标明各管接种的菌名。
2. 用接种针分别穿剌接种(见图 1)枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌。
图1 明胶穿刺液化的形态
3. 将接种后的试管置 20℃ 温室中培养 2~5 天。
4. 观察明胶液化情况。
有些微生物能水解牛奶中的蛋白质酪素,酪素的水解可用石蕊牛奶来检测。石蕊培养基由脱脂牛奶和石蕊组成,是昏浊的蓝色。酪素水解成氨基酸和肽后, 培养基就会变得透明。 石蕊牛奶也常被用来检测乳糖发酵,因为在酸存在下,石蕊会转变为粉红色,而过量的酸可引起牛奶的固化(凝乳形成),氨基酸的分解会引起碱性反应,使石蕊变为紫色。此外,某些细菌能还原石蕊,便试管底部变为白色 。
1. 取两支石蕊牛奶培养基试管,用记号笔标明各管欲接种的菌名。
2. 分别接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌。
3. 将接种后的试管置中,培养 24~48 h。
4. 观察培养基颜色变化。石蕊在酸性条件下为粉红色,碱性条件下为紫色,而被还原时为白色。
1. 取两支尿素培养基斜面试管,用记号笔标明各管欲接种的菌名。
2. 分別接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌。
3. 将接种后的试管置 35℃ 中,培养 24~48 h。
4. 观察培养基颜色变化。尿素酶存在时为红色,无尿素酶时应为黄色。
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