富尔根氏(Feulgen)染色法是根据席夫氏(Schiff)试剂进行的反应而建立的微生物拟核染色法。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸,碱性复红与亚硫酸结合后,失去醌式结构而变为无色。当 DNA 经酸作用而生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后,使醌式结构恢复,合成一种带紫红色的碱性复红衍生物。此染色法对 DNA 具有特异性。微生物细胞用此法染色后,可在普通光学显微镜下原位观察到细胞内拟核的形态和位置。
富尔根氏染色法主要分两步:
1. 将细胞用 1 mol/L HCI 温和水解,使 DNA 中的嘌呤碱与戊糖分开,放出戊糖的醛基;
如果将微生物细胞裂解,使其拟核(即染色体 DNA)被抽提出来,通过溴化乙淀(ethidium bromide,简称 EB)染色并进行琼脂糖凝胶电泳,便可观察到释放到细胞外的染色体 DNA。EB 是一种扁平分子染料。可特异性插入 DNA 碱基对之间,在紫外线照射下,使 DNA 呈现荧光,因而可观察到凝胶中的染色体 DNA,由于在提取过程中大分子染色体 DNA 的随机断裂,所以经凝胶电泳后形成的是一条不整齐的浓的荧光带。