标签: 人角膜内皮细胞 人干细胞培养第十一章
来源:《人干细胞培养》
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(a)用PBSA将角膜清洗3次,每次5 min。
(b)剪除残留的巩膜,结膜和虹膜。
(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II,4℃过夜,轻微搅动。
(d)将加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃摇床摇30 min。
(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。
(f)解剖显微镜下,小心去除小梁网,剥离内皮层并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃,30 min。
(g)加入同等体积的DMEM/F-12/2FB并拍散细胞。
(h)离心400g,10 min,弃去上清。
(i)加人1 ml培养基,轻柔的重悬细胞并计数。
(a)将细胞接种于包被有FNC的6孔板中。
(b)每3天换液一次。
(c)当细胞90%汇合时用胰蛋白酶消化传代。
(a)胰蛋白酶消化细。
(b)将分离出的细胞用培养基以10个细胞/μL的密度重悬,并接种于未经组织培养处理的24孔板中。
(c)7天后用胰蛋白酶消化细胞并离心收集细胞,继续接种。
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