标签: 细胞冻存与复苏 人干细胞培养第七章
来源:《人干细胞培养》
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(a)准备冻存液:90%FBS+10%DMSO;放冰上或4℃冰箱冷却,至少30min。
(b)CB-MNCs细胞计数。
(c)用冷的冻存液重悬细胞,调整细胞浓度为(5〜l0) ×106活细胞/mL。
(d)按1mL/冻存管分装。
(e)立即将冻存管放入慢速冷冻盒,置于-70℃冰箱4〜24h。或者将冻存管放入液氮的控速降温仪中。
(f)4〜24h后,将置于-70℃冰箱或控速降温仪中的冻存管放入耐液氮储存盒,将此盒放入液氮罐的气相(大约-135℃)或液相(大约-196℃)中。
(a)将装有CB-MNCs的冻存管移入37℃水浴中。
(b)先擦干冻存管,然后用70%酒精擦拭冻存管防止污染,打开冻存管。
(C)迅速将细胞悬液(大约1mL)转移到装有1OmL预冷的10%FBS培养基的15mL离心管中。
(d)室温200g离心10min。
(e)倒掉上清,不搅动离心沉淀的细胞团。
(f)用10mL PBSA洗一次,室温20g离心10 min。
(g)根据实验目的,用合适的培养基重悬CB-MNC
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