标签: 酵母 质粒 精编分子生物学实验指南第五版第十三章
利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1,它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长,而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株,通过分离温度不敏感菌落,那么就可能分离到一个可以互补这种突变的酵母菌基因。分离到温度不敏感菌落后,必须采取两个步骤来证明在这种转化到cdc101-1菌株中的质粒含有野生型cdc101基因。第一步,假如这种观察到的互补现象是由质粒引起的,而非cdc101-1回复突变造成,互补质粒的分离必定导致质粒所带的选择标志及互补表型同时消失。第二步,必须排除是否被克隆的基因编码了这种突变的表型抑制基因的情形,而非野生型基因编码。这些均可通过互补实验来实现,并且可证明一个整合到基因组中的克隆基因的破坏是否能够互补原有的突变。来源:《精编分子生物学实验指南》第五版
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