标签: 解析多肽 分离 精编分子生物学实验指南第五版第十章
CE分离来自复合体混合物如蛋白酶解产物的特定多肽尤其有用。以下的方案阐述使用低压样品注射的P/ACE5000CE仪器(Beckman)的用法。但其他仪器也可以依据制造商的操作指南进行同样的分离。来源:《精编分子生物学实验指南(第五版)》
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1. 用以下溶液冲洗进行预处理毛细管:
10 倍柱体积的 0.1 mol/L NaOH,在低压(0.5 lb/in2)下
10 倍柱体积的水
4 倍柱体积的 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30。
存储柱于 0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30,25℃。
2. 将 10 nmol (约 300 g) 溶于 10 ml 的 0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30,制备多肽混合物。以每管 100 μl 冻存未用的混合物。
3. 在 0.5 lb/in2,10 s 内用低压注射上样 10~20 nl 样品。
4. 使用以下条件分离多肽混合物:
电解质:0.05 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.3
探测波长:200 nm
温度:25℃
电压:25 kV
5. 用以下溶液清洗柱子:
0.5 min,水
1.0 min,0.1 mol/L NaOH
1.5 min,水
1.0 min,0.25 mol/L 磷酸钠缓冲液,pH 2.30
室温存储柱子于运行缓冲液或水中。
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