瘦(Clenbuterol)肉精定量检测新方法

瘦(Clenbuterol)肉精定量检测新方法

标签: Clenbuterol定量检测

针对GB-T22286-2008所述瘦(Clenbuterol)肉精定量检测方法处理步骤,微色谱生物科技优化该方案,提供新方法处理步骤。1、样品前处理(1)备样a.收集待检测的肉类、组织类样品;b.将待检测的样品捣碎(普通食品加工机器或均质仪均可)。(2)称量a.称取250mg搅碎的禽畜肉样品于2mL离心管中。注:称量精确至1mg,总质量可控制在250mg±10%的范围内,但在最终计算时要根据实际称重计算。也可以称量2g,定容后取250μL进行后续分析。(3)水解a.加入250µL磷酸钾缓冲液(pH7.4,20mM),充分混匀;b.加入5µLIMCSzyme®β-葡萄糖醛酸酶,轻度涡旋混匀;c.37℃水解2小时。注:如果使用其他公司的酶产品,水解时间应延长至12小时,水解缓冲液参照酶的最优反应条件而定。(4)混匀a.于待测样品中加入25μL内标工作液(10ng/mL);b.用均质仪均质。注:使用BenchmarkBeadBlaster24组织均质仪的参考参数为:Speed4.5M/S,Cycle01,Time30s。(5)振荡离心a.在上清液中加入800µL甲基氰;b.用涡旋振荡器振荡1分钟,c.于13000rpm离心1分钟。(6)浓缩a.取上层清液(约1mL)至新的离心管中;b.氮气吹干;c.加入750µL水;d.涡旋振荡使残渣充分溶解,备用。2、样品的纯化人工方案a.将实验室通用1mL移液器刻度调至1mL,连接DPXTipsTM枪头式分散固相微萃取柱,依次用500µL甲醇、500µL水润洗;b.将平衡后的DPXTipsTM浸入残渣溶液中,上下提取、排放样品溶液4次;c.依次用750µL水、2%甲酸/水溶液及甲醇洗涤微萃取柱。d.用新鲜配制的500µL5%NH4OH/甲醇溶液洗脱。半自动方案a.移液系统+DPX混合模式吸头,可在10分钟之内提取装载有样本的单个96孔板,以备LC-MS/MS分析所用。

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