标签: 皂苷 鉴别 溶血实验 泡沫试验
皂苷的定量测定可以通过薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、比色法及高效液相色谱-紫外吸收联用法(HPLC-UV)等方法进行。
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1.检品溶液的制备:
(1)取皂角碎块1g于大试管(或小烧杯)中,加蒸馏水15ml,于30-90°水浴上浸渍15分钟后过滤,滤液供鉴别用。
(2)取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。
(3)取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟,滤液供鉴别。
2.鉴别试验:
(1)溶血试验:取滤纸片一小块,于小心处滴加皂角浸液一滴,待干后于同处再滴加一滴,如是反复操作至滴加数滴,干燥后无喷雾血球试液(取牛血、羊血或兔血一份,用玻棒或棉签搅和,除去凝集的血蛋白,加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得),数分钟后观察在红色的背底中是否出现无红色的黄色(或透明)斑点(中心处皂解浸液原点)。(本反应亦可在试管中进行,血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后,血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行,并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况)。
(2)泡沫试验:薯蓣浸液,皂角浸液各2ml,分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置,在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生?
(3)醋酐浓硫酸试验(Liebermann-Burchard反应),皂角浸液5ml,于蒸发皿中在水浴上蒸干,加入1ml醋酐使其溶解,滴于干燥比色盘中,从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴,观察颜色变化。另取薯蓣浸液5ml,置于蒸发皿中,在水浴上蒸干,加入1ml醋酐溶液,并倾入比色盘中,(试管)沿管壁加入几滴浓硫酸,观察界面间是否有紫红色环产生?
(4)氯仿-浓硫酸试验(Salkowski反应):取薯蓣醇浸液2ml,在水浴上蒸干,有氯仿1ml溶解,转入干燥小试管中,沿壁小心加浓硫酸1ml,氯仿层显红或兰色,硫酸层有绿色荧光,示含甾体皂苷。
采用比色法测定总皂苷含量时,标准品可以选择两种或两种以上进行结果对比,取二者的平均值作为最终测定结果,使结果更具有意义。测定回收率时,也可以选择两种或两种以上标准品进行对比检测。
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