一、染色体标本制备
1.标本制备:不同标本来源的样品(血液、羊水、成纤维细胞培养物或骨髓)用其相应的标准程序进行制备。
2.用相差显微镜找到合适的中期染色体分裂相,将杂交区域标记出来。
3.将标本立在 37°C 装有 40 mL 胰酶工作液的染色缸中作用 2 min。
4.在一个 HYBrite(Vysis) 装置中人工老化片子,90°C、2 min。
5.在 HYBrite(Vysis) 装置中用 2XSSC 冲洗片子 2 min。
6.将标本在分别盛有 40 mL70%、85% 和 100% 乙醇系列的染色缸中室温下依次脱水 lmin,风干。
二、杂交和洗脱
1.将 M-FISH 探针混合液(Vysis) 加到标记的杂交区域上。
2.将每张标本的杂交区域上覆以盖片,用橡皮泥在盖片周围封片。
3.将标本固定在加湿的 HYBrite(Vysis) 装置中,设置为:变性温度 80°C,时间为 3 min,杂交温度 37°C,杂交时间最少 16 h。
4.将标本在盛有 40 mL0.4XSSC 染色缸中 70°C 条件下洗片 1?2 min,用流动的去离子水洗片 2s。
5.将标本移入盛有 40 mL2XSSC/0.1%NP-40 溶液的染色缸中,室温下作用 IOs06. 每个杂交区域上加 10% 的 DAPI 复染液后盖上盖片,注意不要封片。