间期核F I S H 排序 间期FISH定位可用于位于相同染色体条带的序列的排序。间期染色质比中期染色 质更加松散,在中期染色体分散不佳的探针可以在间期核上排序。至少三个在间期染色 质上排列50kb〜I M b 的D N A 探针序列有必要确定相关位置。杂交条件如上所示( 基 本方案) 。 间期FISH定位是在G 1或 G 2期细胞上进行,大量的这种细胞一般出现在标准的细胞 学上准备收获中期染色体时期。用单个探针杂交可以看到G 1期细胞,每条染色体只有一 个信号, G 2期细胞每条染色体( 姐妹染色单体)有两个信号。从外周血样本中收集血沉 棕黄层制作G 1期细胞丰富的玻片,将收获的细胞低渗、固定、制作玻片( 单元4.1)。 变性、杂交、检测。用三个探针杂交同一张玻片—两个生物素标记和一个地高辛 标记探针、两个地高辛标记和一个生物素标记探针,或一个生物素标记探针、 一 个地高 辛标记探针和双重标记探针。用互补的荧光素观察信号。 一 般分析25〜50 个间期细胞就可以判断顺序了。如果相邻的探针是相同的颜色 (如红-红-绿) ,需要改变其中一个探针的颜色再杂交一次,这对确定探针顺序是必要 的。这样颜色顺序就变成了红-绿-绿或绿-红-绿。如果第三个探针同时被生物素和地高 辛标记,就产生了黄色荧光,红、绿、黄色信号可以直接决定顺序。如果颜色顺序不明 显,有可能探针与间期核相隔很远。当两个探针间距离增加时,尤其是在1.5〜3M b , 核内染色质的缠绕非常有可能影响信号的定位。 参 考 文 献 : Lichter 沒 , 1988, 1990; PinkeletaZ., 1988 编 者 : Joan H. M. Knoll and Peter Lichter" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/07/A1469590556318tejehyan9fpng_small.jpg" style="width: 424px; height: 507px;" />